Замораживание и длительное хранение спермы быка

Замораживание и долгое хранение спермы быкаПространное употребление разыскал способ замораживания и долгого хранения спермы быков в водянистом азоте (-196°). Замороженную сперму можнож доставлять в хозяйства 1—2 однажды в год и употреблять ее по мере надобности. Один-одинехонек разов в месяц сосуды, в тот или другой держится сперма, нужно пополнять водянистым азотом. На племпредприятиях (станциях) по искусственному осеменению сельскохозяйственных животных сперму замораживают с помощью специального оборудования (устройств, аппаратов и т. д.) и берегут в стационарных емкостях, находящихся в хранилищах станций (филиалов). Отсюда ее посылают в обслуживаемые хозяйства. Для замораживания спермы на племпредприятиях (станциях) употребляют должно способы. Способ двухмоментного разбавления и трехступенчатого режима замораживания спермы быков с помощью особых аппаратов (АХК-4, ПЗСС и др.). К замораживанию дозволяют сперму с подвижностью спермиев не гуще 8 баллов и их концентрацией более 0,8 миллиардов. в 1 мл. Потом сперму разбавляют глюкозо-цитратно-желточной средой (35—37°) двухмоментно: первоначально без глиперина, а спустя 4 ч потом остывания к разбавленной сперме методом подслаивания прибавляют этакую же среду, располагающую температуру плюс 2—5° и держащую 16% глицерина. Сперму в глицеринизированной среде выдерживают в бытовом холодильнике 6—12 ч при температуре 2—5° Потом эквилибрации (уравновешивания) инспектируют подвижность спермиев (она обязана водиться не гуще 7 баллов), расфасовывают в стеклянные либо полиэтиленовые ампулы по 1—1,2 мл. Ампулы запаивают и вкладывают в емкости, тот или другой помещают в аппараты для замораживания. Замораживают сперму по трехступенчатому режиму со надлежащей скоростью: от 0 до 15° по 0.5—Грам в 1 мин, от 15 до 50° по 2—3° в 1 мин и от 50 до 80° по 5—7° в 1 мин, после этого емкости (канистры) выносят в водянистый азот для хранения.

Перед осеменением ампулу со спермой оттаивают в ванночке с водой температурой 38—40° в процесс 45—60 с. Подвижность спермиев потом оттаивания обязана водиться не гуще 4 баллов. Способ одномоментного разбавления и прыткого замораживания спермы в форме гранул. В качестве разбавителей применяют синтетические среды № 1 и 2. К разбавителям прибавляют нетоксичный стрептомицин из расплаты 1 грам на 1000 мл воды. Свежеполученную сперму (потом оценки) разбавляют средой № 1 в отношении 1:1, при всем этом концентрация глицерина в разбавленной сперме будет 3,5%; ежели качество спермы дозволяет, ее дополнительно разбавляют средой № 2. При определении ступени разбавления спермы для замораживания учитывают, что в одной гранулке объемом 0,1 мл потом оттаивания обязано храниться более 20—25 млн. подвижных спермиев. Потом разбавления сперму помещают в ванночку с водой, температура тот или иной одинакова температуре спермы, и выносят на 30 мин в холодильник. При всем этом смотрят, чтоб сперма и вода охлаждались не стремительнее 1° в минутку. Потом сперму при температуре 5° эквилибрируют в процесс 5—5 ч. Для приготовления гранул берут агрегат неотзывчивого льда (двуокись углерода) и на его поверхности особым нагревательным устройством (к электроутюгу прикрепляется пластинка с выступами) сооружают лунки поперечником 5—7 мм. В каждую лунку 2-миллиметровым шприцем вносят по две капли спермы. Величина гранул обязана водиться 0,1 мл.

Потом 5—10-минутной выдержки на поверхности неотзывчивого льда гранулки рассыпают в сосуд (кружку) с водянистым азотом. Гранулки со спермой различных быков рассыпают в отдельные емкости. Сперму быков (замороженную) в гранулках можнож расфасовывать в особые трубочки из белоснежной жести с продольным разрезом либо в дюралевые тубы, на тот или другой записывают особым карандашом кличку быка, дату получения спермы и заглавие племпредприятия (станции). В хозяйствах для оттаивания гранул применяют особый раствор (на сто мл дистиллированной воды 2,9 грам лимоннокислого натрия для инъекций, 0,1 грам лимонной кислоты), поставляемый централизованно в особых ампулах по 1 мл. Одна гранулка растворяется в содержимом одной ампулы. Не считая замораживания спермы на неотзывчивом льду, в истиннее период пространное употребление разыскал способ замораживания спермы в форме гранул в водянистом азоте с помощью особых пластинок.

Замораживание спермы в гранулках в водянистом азоте на фторопластовых пластинках. Потом получения и оценки сперму быков разбавляют лактозо-желточной средой с глицерином надлежащего состава: вода дистиллированная — сто мл, лактоза — 11,5 грам, желток куриных яиц —20 мл, глицерин —5 мл. Для предостереженья развития микрофлоры в сперме к среде прибавляют продукт спермосан-3. Перед разбавлением среду подогревают до 30—35°. Данной средой сперму быков разбавляют в 2, 10 разов и наиболее, в зависимости от размера гранул. Ежели употребляют концентрированные гранулки спермы объемом по 0,1— 0,2 мл, то для их требуются наименьшие ступени разбавлении. На пт искусственного осеменения гранулки спермы по 0,1—0,2 мл дополнительно разбавляют. Для этого их перед осеменением скотин оттаивают во флаконе с 1 мл 2,9%-ного раствора лимоннокислого натрия, нагретого до температуры 38—40°. Для замораживания спермы в гранулках объемом 0,5—1,0 мл сперму разбавляют в 10 разов и наиболее. Этакие гранулки перед осеменением скотин не вызывают доп разбавления. Ежели гранулки объемом 0,5 мл, то перед осеменением скотин берут две гранулки, помещают их в стерильный флакон либо пробирку и погружают в теплую воду (38—40°) для оттаивания.

Для замораживания сперму потом разбавления холодят до температуры 2—4° в процесс 4—5 ч, а потом разливают градуированными пипетками, шприцем либо разливочной машинкой в лунки (0,1—0,2 либо 0,5 мл) охлажденной в водянистом азоте фторопластовой пластинки. Пластинку со спермой выдерживают над поверхностью водянистого азота на расстоянии 5—10 сантим. в процесс 1,5—2 мин, а потом погружают ее в водянистый азот на 1—2 мин. Потом замораживания спермы пластинку вынимают из водянистого азота, гранулки спермы собирают в сачок либо контейнер, а потом пересыпают их в охлажденные чашечки. На пт искусственного осеменения гранулки спермы берегут в сосудах Дьюара. Степень азота в их обязан быть существенно выше чашек с замороженной спермой в гранулках. Перед осеменением гранулки спермы из чашек достают охлажденным до —196° пинцетом, оттаивают их, создают Оценку активности спермиев и применяют для осеменения скотин при активности спермиев не гуще 4 баллов. Предметное стекло кладут на столик микроскопа, нагревают сперму до температуры 40° в термостате либо на обогревательном столике и определяют подвижность спермиев. Для последующего хранения разрешается сперма, обладающая подвижность спермиев не гуще 4 баллов. Способ замораживания спермы в облицованных гранулках. По этому способу для замораживания применяют свежеполученную сперму, разбавленную средами ,”° 1 н № 2 надлежащего состава.

Среда № 1. 11%-ный раствор лактозы либо сахарозы       63 мл
Желток куриных яиц          30 мл
Глицерин                              7 мл

Среда № 2. Вода дистиллированная сто мл
Лактоза либо сахароза              6 грам
Натрий лимоннокислый трехзамещенный пятиводный1,4 грам
Глицерин                              5 мл

Специализированные среды наливают в стерильные полиэтиленовые емкости по 200—четыресто мл, тот или другой подсоединяют к специальному агрегату для разбавления спермы. Потом получения спермы ее разбавляют средой № 1 в соотношении 1 : 1 и выдерживают при комнатной температуре 5—10 мин. Потом проводят доп разбавление спермы средой № 2 до вызываемой концентрации (20—25 млн. в дозе). Сперму разбавляют с подмогой специального установки, дозволяющего дозирование вводить среды в отделенную число одноразового полиэтиленового спермоприемника со спермой. Спермоприемник объединяют с тонкостенной полимерной трубкой и выдавливают в нее разбавленную сперму. Заполненную спермой трубку делят с подмогой автомата АРС-2 на отдельные дозы по 0,33 мл с их герметизацией. Облицованные (герметизированные) гранулки помещают в дюралевые контейнеры, тот или другой покрывают пробками. Контейнеры фиксируют в обоймы специального установки для эквилибрации и замораживания спермы. Это агрегат помещают в холодильник для остывания до 2—5°. Потом 5—6-часовой выдержки при этакий температуре обойму аппарата с контейнерами погружают в емкости с водянистым азотом на 8—10 мин.

Активность спермиев потом замораживания спермы инспектируют спустя 24 п. Из каждого контейнера берут по одной гранулке и опускают в воду с температурой 40° для оттаивания. Гранулку вытирают марлевой салфеткой, с подмогой ножниц ее вскрывают и определяют активность спермиев. Для последующего хранения дозволяют сперму с активностью не гуще 4 баллов. Для замораживания спермы в необлицованных гранулках ее потом остывания и эквилибрации накапывают на фторопластовую пластинку конкретно яз спермоприемника.

Замораживание спермы в соломинках (пайеттах). При замораживании применяют полипропиленовые либо поливинилхлоридные трубочки длиной сто мм с внутренним поперечником 2,4 мм, одни точка тот или другой предварительно покрывают особым герметизирующим составом: парафин ГОСТ 13577—12,0, пентаэритритовый эфир канифоли — 44,8, тальк — 10,1, каучук естественный — 1,5, глицерин ГОСТ 6259—71—8,0, краситель — 0,1. Сперму разбавляют трисбуферной средой, хранящей 6,056 грам трисбуфера (трисгидрооксиметиламн-нометан), 3,4 грам лимонной кислоты, 2,5 грам фруктозы, 166,3 мл бидистиллированной воды. Раствор разделяют на две равноправные количества, к главной прибавляют 15,8 мл бидистиллированной воды, 25 мл свежайшего яичного желтка, сто тыс. ЕД лекарств, ко второй— 19,7 мл глицерина, желток и лекарства в тех же числах. Основной разбавитель прибавляют к эякуляту, предварительно доведенному до температуры 25°. Вторую среду медлительно прибавляют к предварительно разбавленной сперме с этаким увольнением, чтоб в соломинке (пайетте) держалось 20—25 млн. подвижных спермиев. Потом разбавления сперму расфасовывают по 0,4 мл в стерильных договорах вакуумным методом. Для этого нужное численность промаркированных соломинок (от сто до 500 шт. в зависимости от числа спермы) ставят раскрытыми точками вниз в стеклянную плоскодонную посуду со спермой в помещают в анаэростат, из тот или другой насосом сначала откачивают воздух до давления 0,95 атм., а потом впускают его.

Воздух нагнетает сперму в соломинку. Заполненные спермой пайетты зажимают в особом держателе, при температуре 25° погружают в герметизирующий состав и покрывают 2-ой точка. Потом герметизации соломинки помещают на медное сито (плетенку) и выносят в пары водянистого азота стационарного хранилища. Плетенку с соломинками опускают в хранилище до соприкосновения с поверхностью азота. Вскипание азота образует ток бездушного газа, тот или другой холодит и замораживает сперму до 100—130° в процесс 5 мин. Соломинки с замороженной спермой выносят в стаканчики, помещают в канистры и закладывают в хранилище с водянистым азотом. Замороженную в соломинках сперму перед внедрением оттаивают в стерильном полиэтиленовом мешочке, помещенном в теплую воду (38—40°) в процесс 12—14 с. Самостоятельно от способа замораживания сперму оттаивают и инспектируют на подвижность спермиев сходу потом замораживания, повторно — сквозь день, 3-ий — сквозь 7—10 дней и 4-ый разов — сквозь 14—20 дней. Замороженная сперма для последующего хранения разрешается при подвижности спермиев не гуще 4 баллов. Для оценки оттаянной спермы в пайеттах (выборочно) создают смешивание ее из одной соломинки с одинаковым численностью изотонического раствора лимоннокислого либо бикарбоната натрия. Для этого один-одинехонек точка соломинки отрезают ножницами и опускают в раствор, а потом этими же ножницами отрезают и 2-ой ее точка. Заработанную консистенция спермы и раствора размешивают соломинкой и с ее подмогой берут каплю для оценки. Для осеменения применяют сперму не ранее 14—20 дней потом замораживания. Оттаявшую сперму опять замораживать нельзя. Для оценки спермы, хранившейся при температуре 2—4°, каплю спермы наносят на предметное стекло и близко с ней наносят каплю 2,9%-ного раствора лимоннокислого натрия либо 1%-ного раствора бикарбоната натрия, потом обе капли, не путая, покрывают покровным стеклом.

Техника сохранности при службе с сосудами Дьюара
При службе с водянистым азотом нужно накрывать незащищенные участки тела, потому что он вызывает обморожение. Действовать должно в защитных очках либо щитках из органического стекла, на руки надевать брезентовые (асбестовые, кожаные) рукавицы либо перчатки. Незащищенный участок тела, на тот или другой попал водянистый азот, живо обливают водой.
При заливке водянистым азотом неохлажденного сосуда нельзя заглядывать в горловину сосуда, потому что при всем этом может произойти выброс водянистого азота вследствие образования огромного числа газа.
Увеличение концентрации азота в воздухе вызывает мигрень, головокружение и утрату сознания. Оттого помещения, где берегут водянистый азот, оборудуют приточно-вытяжной вентиляцией. При обморочном состоянии пострадавшего безотлагательно выносят на чистый воздух.
Нельзя густо накрывать сосуды Дьюара. При транспортировке сосудов с азотом их должно добро закреплять. При перевозке автотранспортом сосуды заливают наполовину гидравлической емкости. Во избежание взрыва сосуды отогревают в изолированном помещении.
Для предотвращения скопления взрывоопасной консистенции в емкости содержание кислорода должно контролировать с подмогой переносного газоанализатора ГХП-3: в хранилищах—1 разов в год, на пунктах—1 разов в 6 месяцев. Потом скопления кислорода в числе 15% сосуд нужно опорожнить в участке, очищенном от предметов органического происхождения: дерева, бумаги, тряпок (необыкновенно промасленных), навоза и пр.

Leave a Reply

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Этот сайт использует Akismet для борьбы со спамом. Узнайте как обрабатываются ваши данные комментариев.